稻米蛋白质含量是影响稻米品质的重要因素之一，解析稻米蛋白质含量的遗传机制对培育优质食味稻米至关重要。本研究以稻米蛋白质含量有显著差异的镇粳2400和嘉禾218构建的RIL群体为材料，利用QTL-Seq方法对RIL群体中的高、低蛋白质含量极端家系进行混池重测序以定位稻米蛋白含量QTL位点，之后构建局部遗传连锁图谱，通过QTL Ici Mapping 4.1软件验证结果并精细定位。F_(8∶9)采用△SNP指数法分析得到4个QTL，分别位于第1、2和12染色体；F_(9∶10)使用ED方法分析得到分布于第1、2、6、7、8、9和11染色体上共8个QTL，其中位于第1染色体的37.64～39.61 Mb区间的QTL与F_(8∶9)检测到的第1染色体36.07～39.87 Mb区间的QTL重合，该QTL命名为qGPC1，位于标记1-3782～1-3834之间，物理距离为516 kb，表型贡献率和LOD值分别为13.20%和3.91。通过测序分析发现，镇粳2400和嘉禾218在已报道的调控籽粒蛋白质含量基因OsAAP6上无差异，因此该区间可能有一个新的基因调控稻米蛋白质含量。同时从RIL家系中筛选出低蛋白型种质做亲本培育出的镇稻1818，米饭食味分显著高于江苏省同熟期对照品种武运粳23号和优质食味主推品种南粳5055，株高、结实率和千粒重均较武运粳23号和南粳5055显著增加。本研究为进一步克隆稻米蛋白质含量基因及解析遗传调控机制奠定了基础，且提供了可供育种利用的优异种质资源。