基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS分析泻白散在正常和慢性支气管炎小鼠体内的入血成分及其代谢差异
目的:利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS),系统分析泻白散在正常状态和慢性支气管炎(CB)模型小鼠中的入血成分及其代谢轮廓,并比较两者之间的差异。方法:30只雌性BABL/c小鼠随机分为正常组、正常给药组、CB组、CB给药组和地塞米松组,每组6只。采用卵清蛋白(OVA)诱导建立CB小鼠模型。正常给药组和CB给药组小鼠于第21天开始灌胃泻白散(生药量13.2 g·kg~(-1)),地塞米松组小鼠同时灌胃地塞米松(0.5 mg·kg~(-1))直至第35天实验结束,随后采集血清样本经药效评价指标确定泻白散干预慢性支气管炎的药效作用。采用UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术对泻白散的化学成分、入血成分及其代谢产物进行鉴定和分析,并结合化学计量法揭示泻白散在正常及CB状态下的代谢轮廓差异。同时,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝脏关键代谢酶细胞色素P4502E1(CYP2E1)、细胞色素P4503A1(CYP3A1)、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶1A1(UGT1A1)和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶1A6(UGT1A6)酶的表达水平。结果:在正常小鼠血清中,初步鉴定出泻白散的原型成分28个,代谢产物158个(包括Ⅰ相代谢产物48个和Ⅱ相代谢产物110个);在CB模型小鼠血清中,鉴定出原型成分32个,代谢产物178个(包括Ⅰ相代谢产物50个和Ⅱ相代谢产物128个)。其中,26个原型成分在两种状态下均被检出,主要包括12个黄酮类、4个生物碱类、5个三萜类、4个有机酸类、3个酰胺类和1个二苯乙烯类化合物。化学计量分析表明,泻白散在正常和CB小鼠中的入血成分及其代谢产物的种类无明显差异,但其在CB小鼠体内的暴露量明显增加。与正常小鼠比较,CB小鼠体内泻白散的氧化、还原、甲基化等Ⅰ相代谢产物以及葡萄糖醛酸化等Ⅱ相代谢产物的含量变化尤为显著。Real-time PCR结果显示,与正常组比较,CB小鼠肝脏中CYP2E1、CYP3A1、UGT1A1和UGT1A6的mRNA表达水平升高,这可能是导致代谢产物含量变化的主要原因。结论:泻白散在正常和CB小鼠中的入血成分及其代谢轮廓存在明显差异,尤其Ⅰ相代谢中的氧化、还原、甲基化及Ⅱ相代谢中的葡萄糖醛酸化,且与肝脏中Ⅰ相和Ⅱ相代谢酶CYP2E1、CYP3A1、UGT1A1和UGT1A6表达水平升高密切相关。
中国实验方剂学杂志
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